Cara Membuat Slide Culture

Slide Culture (Kultur Slide) merupakan teknik yang sangat penting dalam identifikasi fungi. Slide culture adalah teknik menumbuhkan fungi pada slide dengan perlakuan tertentu. Perlakuan yang dimaksud diantaranya adalah fungi ditumbuhkan pada sepotong agar dan di letakkan di atas kaca benda, peletakan tusuk gigi atau batang U (U-shaped glass rod) agar kaca benda tidak bersentuhan langsung dengan kertas tisu, dan pemberian aquades pada kertas tisu untuk menjaga kelembapan udara di dalam cawan Petri slide culture. Tujuan slide culture adalah melihat morfologi mikroskopis fungi, yang terdiri dari bentuk hifa, sporangium, konidia, dll.

Alat dan Bahan

Kultur

• Koloni uji yang berumur 7-10 hari

Media Agar

• Potato Dextrose Agar atau Saboraud Dextrose Agar

Alat

• Cawan Petri steril
• Kertas tisu steril
• Tusuk gigi steril
• Kaca benda dan kaca penutup steril
• Scapel
• Ose (inoculating loop)
• Pinset
• Bunsen
• Mikropipet

Bahan

• Pewarna Lactophenol cotton blue
• Aquades steril
• Alkohol 70% atau etanol 95%

Cara Kerja

Persiapan Sterilisasi Cawan Petri dan Media Agar

1. Bersihkan cawan Petri
2. Atur tisu sesuai dengan bentuk cawan Petri, lalu letakkan di dalam cawan Petri
3. Bersihkan tusuk gigi, kaca benda, dan kaca penutup, lalu letakkan di dalam cawan Petri
4. Bungkus cawan Petri tersebut lalu bungkus dengan kertas buram
5. Untuk memudahkan, masukkan cawan Petri ke dalam kertas plastik yang telah dilubangi
6. Masukkan ke dalam autoclave beserta media agar dan aquades
7. Sterilisasi

Persiapan Cawan Petri untuk Slide Culture

1. Potong media agar dengan ukuran 1x1 cm, atau sesuai dengan ukuran kaca benda. Disarankan untuk memotong agar dengan ukuran yang lebih kecil dari ukuran kaca benda
2. Susun alat-alat di dalam cawan Petri dengan urutan sebagai berikut (dari yang paling bawah):
3. Kertas tisu --> Tusuk gigi (disusun sejajar dengan jarak lebih kurang 1.5 cm --> Kaca benda (diletakkan bersilangan dengan tusuk gigi).

Pemindahan Isolat ke Cawan Petri

1. Sterilkan scapel menggunakan bunsen, lalu ambil satu potong media agar
2. Letakkan potongan tersebut di atas kaca benda
3. Sterilkan ose menggunakan bunsen, lalu ambil isolat koloni uji
4. Goreskan pada salah satu sisi potongan agar
5. Lakukan hal yang sama pada ketiga sisi agar lainnya.
6. Sterilkan pinset dengan menggunakan bunsen, ambil kaca penutup, lalu letakkan di atas potong agar
7. Dengan menggunakan mikropipet, berikan beberapa tetes aquadest steril pada kertas tisu
8. Tutup cawan Petri, lalu seal (bungkus sisi cawan Petri menggunakan plastic wrap)
9. Simpan pada suhu ruang
10. Diamati setiap 1x24 jam

Hasil slide culture

Pengamatan Hasil Slide Culture

1. Bersihkan kaca benda dengan menggunakan alkohol
2. Teteskan 2-3 tetes larutan lactophennol cotton blue
3. Selanjutnya, teteskan 1-2 tetes alkohol
4. Dengan menggunakan pinset, ambil kaca penutup pada cawan Petri slide culture
5. Letakkan pada kaca benda yang telah ditetesi lactophennol cotton blue dan alkohol
6. Amati menggunakan mikroskop

Hasil pengamatan menggunakan mikroskop

Terima kasih, selamat mencoba.